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發布于 2022-10-20
如何制作完美的瓊脂糖凝膠圖?
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一、什么是瓊脂糖凝膠

 

瓊脂糖凝膠是以瓊脂糖為支持介質制備的凝膠。瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾后熔點降低的低熔點瓊脂糖,瓊脂糖的熔點在62?65°C之間,融化后在37°C下可維持液態數小時,30°C時凝固成膠。多用于對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠 由于孔徑大常用于大分子蛋白質、DNA的分離。

 

二、瓊脂糖凝膠用途

 

瓊脂糖凝膠可以用于生化、醫學研究領域。在生化上可作為凝膠電泳的支持物和親和層析的載體,在醫學上還可用于研究病毒嗜菌體、細菌、臨床檢驗、生化分析、蛋白質、核酸、抗原、抗體,以及多糖的分離、提純及藥物的制備。

 

做一個完美的瓊脂糖凝膠圖,緩沖液的選擇很重要。

 

三、如何選擇合適的緩沖液

 

最常用的緩沖液是TAE緩沖液和TBE緩沖液。一般來說,實驗室通常選擇這兩者中的其中一種緩沖液,所以了解兩個緩沖液之間的區別對您的實驗是非常重要的,那么如何區分這兩個緩沖液呢:

1.TAE是Tris-乙酸,緩沖容量小,但是溶解度大,易于儲存;TBE是Tris-硼酸,緩沖容量大,但是溶解度小,不易長期儲存,易產生沉淀。

2.TAE適合較大的DNA片段,而TBE適合較小的DNA片段。

3.如果凝膠運行時間長,建議使用TBE。如果您計劃將DNA用于任何下游應用,則建議您使用TBE。

4.TAE易于儲存,更加穩定,而TBE幾周內會出現沉淀。

 

四、新鮮的緩沖液

 

選擇好緩沖液后,準備一份從未使用過的緩沖,新鮮的小份緩沖液,可以儲存5倍或10倍的緩沖液等,但使用前一定要稀釋。使用新鮮的緩沖液,用于制備凝膠.實驗結果會變得更清晰,條帶更均勻。

 

五、緩沖液的溫度把控

 

正所謂慢工出細活,制作活瓊脂糖凝膠一定要有耐心。凝膠運行電泳電壓應在75V以下,緩沖液不要過熱。緩沖液的溫度是是造成條帶不清晰、不均勻的主要原因之一。為了防止緩沖液出現過熱的情況,在運行前,可以將緩沖液或凝膠冷卻,或在冷藏室運行凝膠。


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作者:網絡轉載 來源:https://bitesizebio.com/50016/troubleshooting-agarose-gel/
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