一、細菌生化檢驗實驗介紹
石蕊既是pH指示劑又是氧化還原指示劑。在酸性溶液(pH 4.5)中為紅色,在堿性溶液(pH 8.3)中為藍色。介質的自然色應為紫藍色(pH 6.8)。石蕊可以被某些細菌還原為無色基質。
牛奶含有乳糖和三種主要蛋白質,即酪蛋白,牛奶蛋白質和乳球蛋白。
牛奶凝結主要是由含有凝乳酶的細菌引起的,凝乳酶可將酪蛋白轉化為酪蛋白,或由于乳糖發酵產生大量酸而導致酪蛋白沉淀。
一些細菌產生脂肪酶,脂肪酶可以分解牛奶中的脂肪,形成黃色透明液體。
一些細菌具有酪蛋白水解酶,可以催化酪蛋白水解,最終將其轉化為透明的液體酪蛋白沉淀。此過程稱為肽化。
二、細菌生化檢驗實驗試劑
| 序號 | 產品 | CAS號 | 備注 |
| 1 | 脫脂奶粉 | ||
| 2 | 石蕊 | 1393-92-6 | |
| 3 | 水 | ||
| 4 | 乙醇 | 64-17-5 |
脫脂奶粉100.0克,石蕊屬,水1000.0 mL
三、細菌生化檢驗實驗步驟
將奶粉完全溶解在水中,調節至pH 6.8,添加石蕊溶液,直到其呈現紫藍色(pH 6.8),分成試管,每管約5 mL。在115°C下滅菌10分鐘,迅速冷卻,然后放入冰箱中以備后用。
石蕊溶液的制備方法:稱取2.5 g石蕊,在碗中研磨,轉移到裝有40%乙醇水溶液的50 mL燒瓶中,煮沸1分鐘,靜置約10分鐘,吸取上清液并將其轉移到另一個在燒瓶中,向原始燒瓶中加入50 mL 40%的乙醇水溶液,煮沸1分鐘。
將上清液添加到之前的上清液中,將兩種上清液均勻混合,離心沉淀,將上清液倒入100 mL量筒中,用40%乙醇補足100 mL,并逐滴加入1 M鹽酸直至溶液呈紫色,這是2.5%的石蕊溶液。
95%乙醇42.1 mL加水至100 mL是40%乙醇溶液。
3.測試方法
接種受試細菌的18-24小時培養物。如果是厭氧菌,則在培養基試管中加入無菌鐵屑或指甲,并蓋上無菌凡士林,然后在36±1℃下培養。 -14天。
四、細菌生化檢驗實驗結果的判斷
1.粉紅色:將乳糖發酵產生酸;
2.紫色藍色:乳糖經過發酵并保持其原始顏色;
3.藍色:堿性反應,乳糖發酵,細菌分解培養基中的含氮物質產生堿性物質;
4.白色:石蕊恢復了;
5.澄清:消化乳蛋白(蛋白糖化);
6.凝塊會凝結:由于大量的酸產生,牛奶和雞蛋會凝結。
7.產氣:乳糖分解產生酸和氣體,強烈的發酵會破壞血凝塊。
如果沒有脫脂奶粉,則將新鮮的牛奶放在冰箱中過夜,去除奶油層,在流動的蒸汽中加熱和消毒脫脂奶1小時,冷卻至10攝氏度以下,用無菌紗布過濾,然后添加石蕊溶液直至熏衣草,分開試管并與以前一樣消毒。