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        發(fā)布于 2022-09-08
        蛋白酶K產(chǎn)品性質(zhì)與注意事項
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        產(chǎn)品描述:
        Proteinase K(蛋白酶K)是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,其相對分子量約為29.3 kDa,可切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。Proteinase K應(yīng)用廣泛,可用于制備脈沖電泳的染色體DNA,蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶等實驗,而變性劑如SDS(1%)可提高其活性,常用工作濃度為50-100 μg/mL,根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH、溫度等因素確定具體的工作濃度。
         
        產(chǎn)品性質(zhì):
        1)本品來源于基因重組酵母菌株;
        2)純度(Native PAGE電泳檢測):≥95%;
        3)比活性值(Specific activity):≥30 U/mg蛋白;
        4)不含RNase和DNase;
        5)在尿素和SDS中活性穩(wěn)定存在;
        6)在較廣的pH范圍內(nèi)(pH 4.0 – 12.0)均有活性,最佳pH范圍為pH 7.5 - 9.0;
        7)反應(yīng)條件:反應(yīng)緩沖液中37℃ - 70℃溫育1 h。推薦反應(yīng)溫度選擇70℃;
        8)活力單位定義:在37℃,pH 7.5的條件下,每分鐘釋放1 μM酪氨酸所需要的Proteinase K量定義為1個活性單位;
        9)失活方法:反應(yīng)體系中加入PMSF或DFP抑制劑即可失活,65℃溫育10-15 min可部分失活。
         
        運輸和保存方法:
        冰袋運輸。4℃干燥保存,有效期3年。更長期保存,可置于-20℃冷凍保存。
        使用方法
        1. 20-40 mg/mL Proteinase K儲存液的配制
        1)將干粉溶解于稀釋緩沖液中,配制成40-80 mg/mL原液;
        【注】:稀釋緩沖液配方:20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1 mM CaCl2。
        2)使用低蛋白吸附的0.22 μm濾器過濾除菌;
        3)加入等體積無菌甘油,配制成含50%甘油的Proteinase K儲存液。
        【注】:Proteinase K儲存液4℃保存1年。若需反復(fù)使用,需分裝保存。

        按照核酸提取說明書添加指定量Proteinase K儲存液即可。

         
        注意事項:
        1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
        2)啟用后如需反復(fù)使用,需置于-20℃~-80℃冰箱冷凍或者配制成溶液后過濾除菌分裝保存。
        3)本產(chǎn)品僅作科研用途!


        作者:未知 來源:網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)載
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